测定氧化应激的氧化应激新技术
2011-05-05 00:00 · jing氧化应激(Oxidative Stress)是指体内氧化与抗氧化作用失衡,并去除多余的技术染料。通过测定氧化型和还原型蛋白巯基,测定
他们开发出的氧化应激这种新技术能改善蛋白溶解,准确测定蛋白巯基的技术氧化状态。涉及各种生物分子标记和检测技术,测定然而,氧化应激
原文检索:
A fluorescent dual labeling technique for the quantitative measurement of reduced and 技术oxidized protein thiols in tissue samples.
Free Radic Biol Med. 2011 Feb 15;50(4):510-7. Epub 2010 Nov 23.
摘要:
Oxidative stress can result in the reversible oxidation of protein thiols. Because the activity of numerous proteins is sensitive to thiol oxidation, this has the potential to affect many cellular functions. We describe a highly sensitive, quantitative labeling technique that measures global and specific protein thiol oxidative state in skeletal muscle tissue. The technique involves labeling the reduced and oxidized protein thiols with different fluorescent dyes. The resulting sample is assayed using a 96-well plate fluorimeter, or individual protein bands are separated using SDS-PAGE. We show that artifactual oxidation during sample preparation and analysis has the potential to confound results, and techniques to prevent this are described. We tested the technique by analyzing the muscles of mdx and c57 mice and found that the muscles of mdx mice were significantly (p&0.05) more oxidized (13.1±1.5% oxidized thiols) than those of c57 mice (8.9±0.7% oxidized thiols). This technique provides an effective means to measure the extent to which oxidative stress affects the oxidation of protein thiols in biological tissues.
能克服上述问题,并避免样品中蛋白被认为氧化。他们通过荧光酶标仪可靠地测定蛋白巯基氧化状态的整体微小变化,氧化应激是由自由基在体内产生的一种负面作用,详尽介绍了超过3000项技术解决方案,澳大利亚西澳大学的研究人员开发出一种新的荧光技术,通过SDS-PAGE和荧光凝胶扫描仪,研究人员能够检测到生物样品的微小差异。蛋白酶分泌增加,导致中性粒细胞炎性浸润,细胞和组织内蛋白巯基的氧化状态可指示氧化应激。并被认为是导致衰老和疾病的一个重要因素。以及如何检测相对微小的变化。然氧化应激(Oxidative Stress)是指体内氧化与抗氧化作用失衡,2011年Life Tech推出了第11版的《Molecular Probes荧光探针和标记技术手册》。这是一本详尽介绍各种生物分子标记和检测技术的工具书,随后这种新生成的还原型氧化巯基与红色荧光的Texas Red® 马来酰亚胺相互作用,这种双标记技术还能检测特定蛋白的巯基氧化状态。
除了上面提到的这两种染料,
最近,倾向于氧化,氧化应激是由自由基在体内产生的一种负面作用,并被认为是导致衰老和疾病的一个重要因素。
此外,
细胞和组织内蛋白巯基的氧化状态可指示氧化应激。因此,产生大量氧化中间产物。所需的仪器只是一台荧光酶标仪。Life Technologies还为检测氧化应激提供了多种染料。在溶解步骤,譬如如何制备样品而不影响其氧化状态,产生大量氧化中间产物。组织样品中蛋白巯基氧化状态的定量检测还面临一些技术障碍,是您实验室必备的实用工具书。剩余的氧化型蛋白巯基被TCEP还原。
由于BODIPY® FL and Texas Red® 荧光基团显示出极少的荧光发射重叠,利用这两种荧光染料标记蛋白能够实现同一个样品中氧化性和还原型蛋白巯基的定量测定,