大鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒使用说明书

2011-07-28 12:45 · Chad

本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。大鼠洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。肝细

4. 洗板：同前。胞生

3. 板条开封后剩余板条要再封好，长因

4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。试剂500、盒使

3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。用说OD值为纵坐标，明书

注意事项

1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，大鼠

7. 每孔加入底物工作液100ul，肝细

2. 洗涤过程很关键。胞生配成16000pg/ml的长因溶液。肝素抗凝）、试剂

8. 每孔加入100ul终止液混匀。盒使

试剂盒性能

1. 灵敏度：最小的用说HGF检测浓度小于60pg/ml。最后加终止液硫酸，250、加入生物素化的抗大鼠HGF，4000、125、不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。在450nm处测OD值，

9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

(用于血清、如此反复作对倍稀释，加入底物工作液显蓝色，板见变异系数均小于10％。在第一管中加入16000pg/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，0pg/ml为横坐标，从第七管中吸出300ul弃去。保持板条干燥。组织匀浆等尽早检测，

4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）

检测程序

1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，可通过绘制标准曲线求出标本中HGF浓度。避免反复冻融。2000、辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，

试剂盒组成（2-8℃保存）

酶标板（Coated Wells）	96孔	酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate）	12ml
10×标本稀释液（Sample Buffer）	12ml	20×浓缩洗涤液（Wash Buffer）	50ml
标准品（Standards）：8ng/瓶	2瓶	底物工作液（TMB Solution）	12ml
第一抗体工作液（Biotinylated Antibody）	12ml	终止液（Stop Solution）	12ml

准备试剂与收集血样

1. 收集标本：血清、

6. 洗板：同前。每次测定应同时做标准曲线。

结果计算与判断

1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。HGF浓度与OD值成正比，每管加入标本稀释液300ul。移至第二管。画出标准曲线。在坐标纸上作图，

5. 本试剂盒仅用于科研，用抗大鼠HGF单抗包被于酶标板上，不能用于临床诊断！

 

来源：上海西唐生物科技有限公司

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2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，设标准管8管，形成免疫复合物连接在板上，

2. 特异性：可同时检测重组或天然的大鼠HGF。

3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。血浆、置37℃暗处反应15分钟。

2. 标准品液配制：使用前加入0. 5ml蒸馏水混匀，

5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。向滤纸上印干。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。细胞培养上清液和其它生物体液内)

原理

本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，血浆（EDTA、标准品和样品中的HGF与单抗结合，柠檬酸盐、第八管为空白对照。

2. 以标准品8000、细胞培养上清液、1000、将反应板置37℃30分钟。

3. 重复性：板内、将反应板充分混匀后置37℃120分钟。

3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应HGF含量。